用常规反相色谱柱进行样品分析的注意要点

反相色谱柱进行样品分析时：

1确保流动相洁净，每隔24-48小时就应新配水相流动相，并同时更换或仔细清洗流动相溶剂瓶，以避免流动相长菌。确保实验室纯水系统工作正常。

2确保样品不含颗粒型杂质。如样品过脏，或有微粒存在，需要考虑适合的样品制备方法。在使用样品过滤器时，确保滤膜为0.22μm，且与样品溶剂*兼容（不发生溶解）。也可考虑使用高速离心法去除颗粒性杂质，例如8000rpm转速以上离心20分钟后，移取样品上清液进样。

3确保样品溶液与流动相条件兼容，进样后不会发生沉淀、或溶剂不互溶情况。通常使用流动相或比流动相洗脱强度弱的溶液(即有机溶剂比例较低)溶解或稀释样品，这样可以获得的峰形和检测灵敏度。

4如系统在线混合生成流动相，预先检查流动相各组分的兼容性。例如，当磷酸盐缓冲液与高浓度乙腈（例如≥70%）混用时，可能发生盐析出。

5了解色谱柱的操作使用限度。如果所使用的流动相条件、柱温、以及样品溶液条件，不利于色谱柱寿命时，请使用保护柱以延长柱寿命。

6在使用流动相进行柱平衡之前，如果流动相中含有可能析出的缓冲盐，先使用5倍柱体积的有机溶剂-水溶液进行过渡。例如，在使用40/60甲醇/磷酸盐缓冲液流动相之前，先使用5倍柱体积的40/60甲醇/纯水溶液冲洗色谱柱。

7在常规分析过程中，每针或间隔若干针清洗柱内可能积累的污染物。完成分析后，*清洗色谱柱，除去柱内缓冲盐和污染物。

8在反相色谱柱使用过程中，定期进行柱效测试，记录塔板数与压力，从而追踪监控色谱柱的性能变化。柱效测试方法应固定。

9反相色谱柱应保存于合适的高比例或100%有机相（如乙腈或甲醇）中。如色谱柱使用于高温或PH条件，或停用色谱柱超过72小时，用100%乙腈保存色谱柱。