解读氨基柱测酸性样品的HILIC模式

●氨基柱测酸性样品,应该是用氨基柱的HILIC模式。酸的存在可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化,导致使用一段时间后对于某些类的分析物保留性质有所改变或表现在柱效下降。建议:用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0%NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱(冲洗后当然要再用不含碱的流动相洗去多余氨),之后再进行分析这类酸性分析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1%。

●氨基柱不能在低PH值下使用,会水解的,这样柱子就报废了。

●关于反冲的问题,只要是柱子端头和端尾筛板直径一致,*可以反冲,并且反冲对柱子是很有必要的,因为流动相长时间往一个方向流动会造成C18官能团朝一个方向“倒伏”,这样对分析造成影响,反冲可以使官能团“竖立”,对分析有利。

●如果用一个质量好的又和分析柱匹配保护柱,应该不会影响分析。匹配指的选用柱芯填料和分析柱填料在粒径和固定相类型上一致,质量好,首先要求柱芯装填质量一定要好,不能因为是柱芯,就随便把填料用干法往里面一放就完事了;另外柱芯卡套接入系统的产生的死体积要小。

一个质量好的保护柱,有时还能增加分离柱效。

●用的是四元梯度泵A50%甲醇B50%水经常出现停或进气泡这是什么原因:这个比例下因为使得流动相黏度zui大,所以zui容易产生气泡了,一般我们设计洗脱程序都避开这个比例。

●水/甲醇比例在55:45时,黏度和柱压有个极大值。50:50接近了这个极值,柱压是比较高的,但影响柱压zui大的还是填料粒径和色谱柱内径。系统压力高,可能会因溶剂泵中的过滤头供液速度跟不上而导致气泡进入系统,停机也应该是因为气泡进入压力下降的原因,可考虑更换液体通量更大的过滤头。

●色谱柱被强保留物质污染后,保留时间提前和滞后的情况都有,具体要看污染物的性质,还要看分析物、固定相和污染物三者共同作用的情况,情况比较复杂,有时候比较难预测是提前还是滞后。不过你平时维护的时候,注意在测定后将污染物用有机溶剂反冲清洗,就可以减轻或避免这种情况的出现。建议每个分析方法用专门的色谱柱,长远看,这样更节省色谱柱的费用。

●色谱技术中的化学衍生法系指在色谱过程中用特殊的化学试剂(一般称为衍生化试剂或标记试剂)使样品成分转变相应的衍生物之后进行分离检测或进行检测的方法。目的为:1.将紫外—可见强吸收功能基团引入被检测对象或将其转变为荧光衍生物,以提高检测灵敏度;2提高对分析样品的分离和选择性。长度和粒径都是用来改变柱效的,氨基柱选择原则是够用就好。