C18反相色谱柱的操作与清洗

C18反相液相色谱柱是一种常用的色谱柱产品，主要由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，被广泛用于多个领域中。在c18反相液相色谱柱的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透特性，延长柱子的使用寿命非常重要。使用时间后就会出现柱压升高、柱效降低、峰形畸变和分离度降低、保留时间改变等变化，如不采取措施，将会缩短色谱柱的使用寿命，影响工作效率，并造成一定的经济损失。

 

C18反相色谱柱操作步骤：

 

1.平衡开始时将流速缓慢地提高，用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线（缓冲盐或离子对试剂流速如果较低，则需要较长的时间来平衡）

2.如果使用的流动相中含有缓冲盐，应注意用纯水”过渡”即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子。

 

C18反相色谱柱的清洗：

 

1、如果您的样品分析只用到一般的甲醇，乙腈和水的流动相(包括流动相里面加了点酸)，在做完样品后可直接用65％的乙腈/水或者纯甲醇进行清洗40～60mins即可保存；

 

2、如果您的样品分析用到了含缓冲盐或者酸或者离子对试剂的流动相，在做完样品后的清洗必须按照下列2个步骤进行清洗柱子(不论您的柱子是否是可以过纯水的极性柱子还是一般的通用性柱子)：

a、重要的步骤——用5％的乙腈(甲醇)/水，清洗80ml溶剂以上(250mm色谱柱，150长度的柱子需要至少60ml溶剂清洗)，1~2ml/min(根据时间自由调节流速；LC/MS柱子应以0.2ml/min的流速进行)，如果因为时间来不及而清洗不了那么长时间，可以适当加大流速，比如1.5 or 2ml/min；

b、65％的乙腈（甲醇）/水或者纯甲醇/乙腈，清洗30～60mins，1~2ml/min。