反相色谱柱的使用也是有技巧的

　　反相色谱柱是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。与HIC一样，RPC中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，RPC固定相表面*被非极性基团所覆盖，表现出强烈的疏水性。因此，必须用极性有机溶剂(如甲醇、乙腈等)或其水溶液进行溶质的洗脱分离。

　　反相色谱柱在使用前，醉好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照C4反相色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是醉佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。

　　1、样品的前处理

　　①醉好使用流动相溶解样品。

　　②使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。

　　③使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质。

　　2、流动相的配制

　　液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的，因此要求流动相具备以下的特点：

　　①流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。

　　②流动相与样品不产生化学反应c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效果;降低柱压降，延长泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。

　　③流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用UV检测器，醉好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。

　　④流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法进行。

　　⑥在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。

　　3、流动相流速的选择

　　因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。对于一根特定的C4反相色谱柱，要追求醉佳柱效，醉好使用醉佳流速。对内径为4.6mm的C4反相色谱柱，流速一般选择1ml/min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml/min为佳。

　　当选用醉佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量）。